Determinación del grupo RH en Porta

Fundamento:
se basa en la detención de antígeno de sobre superficies de los hematíes problema, empleando como reactivo suero monoclonal humano contiene anticuerposD. En el caso que los hematíes contenga el antígenoD se producirá una aglutinación.

Material

•  porta
•  pipetaPasteur
•  rotulador
•  visualizador luminoso
•  palillos agitadores

Reactivo

 suero anti d y albúmina bovina

Muestra

 sangre total anticoagulada

Técnica:
1.dividir puerta y marcamos S-A depositamos dos gotas de suero anti D seccion S y seccion A poner 2 gotas albúmina 
2. depositamos una gota de sangre en cada sección y mezclamos con los palillos agitadores 
3. poner portada en mis realizador calentado y balancear para facilitar la mezcla.

Resultado:
tras esperar dos minutos aparecerá aglutinacion positiva aparecen grumos rojos aglutinación negativa la mezcla da lugar a suspensión homogénea de hematíes.
la mezcla sangre más albúmina debe dar siempre negativo

HOJA DETRABAJO :

1. ¿Qué tipo de muestraEMPLEAMOS en esta técnica ? sangre total anticoagulada.
2. ¿Para qué se utiliza el visualizador ? para favorecer la mezcla de sangre y reactivos.
3. ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones ?  pequeños coagulos de fibrinaCONTENIDOS en la muestra .
4. ¿Qué ocurre si aglutina la sección A ? que no se puede informar los resultados,esta sección debe ser  siempre negativa.

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :
La sangre analizada es Rh positivo

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA:

FUNDAMENTO:
Consiste en observar la aglutinacion de los hematies enfretados a una serie de antisueros coincidiendo y de reconocida eficacia , para determinar el grupo ABO del individuo.

MATERIAL:

• Portaobjetos
• Pipeta pasteur
• Palillos mezcladores
• Reloj.

REACTIVOS:

• Suero anti-B.
• Suero anti-A.

MUESTRA:

• Sangre capilar o Venosa. 

TÉCNICA:

1. Dividimos el porta en dos secciones A/B .
   
2. Depositamos una gota de suero de anti-A y anti -B. y ponemos la misma cantidad de sangre que de suero.
   
3. Mezclamos las gotas con un palillo ,diferente para cada seccion y mover el porta de arriba y abajo ,durante 2 minutos y observamos la aglutinación.

LECTURA RESULTADOS:

• Si es positivo sale aglutinación y negativo ausencia de aglutinación , aparece en unos segundos.
• Si sale A hay que hacer la misma técnica para ver que tipo de A es ..en mi caso aparece A1.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

Hematíes y suero anti-A                Hematíes y suero anti-B            Grupo eritrocitario. 

                     +                                     -                                            A                    

                    -                                       +                                           B                      

                  +                                         +                                          AB                      

                   -                                         -                                           0                        

HOJA DE

 TRABAJO

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ? La aglutinación.
2. ¿Qué muestra utilizamos ? Sangre capilar como  se ve la aglutinación positiva ?Grumos rojos que flotan sobre el líquido antisuero.
3. ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A? Reexaminar la reacción del anti -A1 al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil.

Resultados obtenidos

• Lorena, es del grupo A ,le hemos repetido la muestra con anti -A 1 y sigue aglutinando.
• Ainoha,es del grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.
• IGNACIA  grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.

DETERMINACION CELULAR EN TUBO :

FUNDAMENTO: 

Consiste en buscar presencia o no de aglutinaciones en los hematíes reaccionados. 

MATERIAL:

• 4Tubo centrifuga.
  
• Rotulador .
• Pipeta Pasteur.
• Centrifuga. 
• Gradilla.

REACTIVOS:

• Suero anti- A
• Suero anti- B
• Suero anti - AB
• Solución salina fisiológica.

MUESTRA: Sangre anticoagulada bolsa.

TÉCNICA: 

1. Cojo 2 tubos cónicos y añado 1 ml de sangre y 2 ml suero fisiológico ,centrifugo 2000 rpm - 4 minutos.
2. Retiro sobrenadante y cojo 2 gotas de el poso  y lo echo a un tubo de centrifuga y añado 5ml suero salino y homogeneizar .
3. Añado a cada tubo A,B,C una gota de suspensión ,después cojemos el reactivo y pongo 2 Gotas de antisuero A al tubo A ,el antisuero B al tubo B Y antisuero AB  al tubo AB .
4. Centrifugo todos los tubos a 1000 rpm por 1 minuto.

LECTURA RESULTADOS:

Después de centrifugar ,golpeamos el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y observamos la presencia o no de aglutinación .

Reacción positiva : Los hematíes se suspende homogéneamente.

Reacción negativa: se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que tipo de tecnica inmonologica se emplea en este analisis?La aglutinación.

2.¿A que concentracion se prepara la suspension de hematies problema? 2% O 4%

3.¿Como se ve una aglutinacion positiva? Se observa un botón de hematíes 

4.¿A que se debe el fenomeno roleaux?al fibrinógeno, las gammaglobulinas ,el dextrano y la polivinilpirrolidona.

5.¿Como se pueden evitar los falsos positivos?Con el lavado previo de los hematíes problema .

determinación sérica del grupo AB0

Fundamentó
el suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente antígenos que no están presentes en sus propios hematies,por eso, al hacer reaccionar este  suero con hematíes conocidas del grupoA y grupoB  se producirán aglutinacion al ser enfrentado con antígenos diferentes de los propios hematies.

Material:
Tubo centrifuga
Pipeta pasteur
Bago agua
Centrifuga
Gradilla
Rotulador

Reactivos:
Hematies grupoA1
Hematies grupoA2
Hematies grupo B
Hematies grupo0
Hematies sangre problema

Muestra: 

suero

Tecnica:

1.  Para evitar falsos negativos presencia de complemento activo realizamos un baño de agua a 56 grados durante diez minutos así evitamos los fenómenos de hemolisis.
2.  Lavamos tres  los hematíes con solución salina y cogemos en hematies del 5 %.
3. Rotulamos los tubos con A1,A2,B,O y C.
4.  Añadimos dos gotas de suero inactivado y echamos una gota de hematies correspondiente a su letra y la letra C vertemos una gota de henaties qué sirve como control negativo 
5.  Agitamos y centrífugamos 1000rpm durante  un minuto.

Resultados:
Golpeamos el fondo del tubo y observamos si hay grumos rojos ,hay aglutinacion y si se aprecia homogeneizado no hay agulinacion.

HOJA DE trabajo

1. ¿Que son los hematíes tipados ?son los que sabemos de que grupo son.
2. ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente?al 5%
3. ¿Qué clase de muestra se enplea en esta técnica ? suero del paciente inactivado o plasma.
4. ¿Qué ocurre cuando el tubo C presente aglutinación ? Que hemos cometido algún error.

RESULTADOS OBTENIDOS

NO ME HA SALIDO BIEN LA PRACTICA AGLUTINABAN TODOS LOS TUBOS.

El resultado no se puede interpretar.

Deteminacion Du

Fundamento: 

observar si hay Du en superficie de membranas de eritrocitos, se produce la union de anticuerposD y dara lugar a aglutinacion en presencia suero humano .se realiza cob prieba de coombs indirecta.
Material:

• Tubo hemolisis
• Centrifuga
• Pipeta pasteur
• Gradilla
• Baño agua

Reactivo:

• Suero antiD
• Suero coomb
• Solucion salina fisiologica.

Muestra:

 hematies 5%

Tecnica:
1.en n tubo vertemos una gota suero antiD y una gota hematies al 5%.
2.Mezclamis e incubamos 37° durante 30-45 minutos
3. Despues de incubar lavamos hematies solucion salina 3 veces .
4. Añadimos sobre sedimento hematico 1 gota suero coombs
5. Centrifugamis 1000rpm durante 1 minuto.
Resultados:

Observamos aglutinacion o o no caso de duda observamos al micro con ayuda de un porta y cubre el tapon hematico a 40x.
Interpretacion clinica:
Si hay aglutinacion es positivo y se indica Rh Du.
No aglutinacion se clasifica como Rh negativo.
Para evitar falsoa positivos se realiza una prueba de coombs directa.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué contiene el suero de Coombs ?suero antiglobulina humana de conejo.
2. ¿Qué se detecta con  la prueba directa ?un falso positivo.
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?un Rh + Du (débil).
4. ¿Qué buscamos en la sangre del paciente ?antígeno Du.
5. ¿Qué ocurre si el control es positivo ? que la membrana de los hematíes del paciente hay antígeno Du.

Determinación rápida de la hemoglobina

Fundamentó 

se basa en la concentración de hemoglobina sea superior a la permitida esto se ve con una solución de sulfato de cobre si se queda arriba tiene anemia y no puede donar y si se continúa abajo es que la concentración de hemoglobina baja y no tiene anemia
Material

• capilar 
• lanceta
• vaso de precipitados 50 mililitros 

Reactivo:

• Disolver 17g sulfuro de cobre en 100 ml agua destilada.
• Mezclar 51ml solucion madre con 49ml agua destilada.

Muestra:
Sangre capilar
Tecnica:
1.Disponer la solucion de sulfato de cobre en un vaso precipitado 50ml.
2.recoger 1 gota sangre problema.
3. Dejamos caer 1 gota sangre sobre soluccion sulfato de cobre.

Lectura resultados:
Si la gota sangre ea mas densa cae al fondo del vaso. Si la gota es menos densa se queda en la superficie del vaso precipitado.
Interpretacion clinica:
  Si la concentración de Hb es superior a 12 g/dl,la persona puede donar sangre,en casa contrario,la donación no puede ser realizada.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener  una mujer antes de la donación ? 12,5g/dl
2. con  qué otra solución comparamos la densidad de la sangre ?con solución de sulfato de cobre a una densidad de 1,052g/dl

Prueba cruzada mayor

Fundamento :

para antes de Transfusiones .consiste en enfrentar al suero del receptor con hematies del donante
1 en medio salino
2 en medio aluminoso
3 frente al suero antiglobulina the Combs (detectan los anticuerpos que se hayan quedado fijados en la membrana eritrocitaria).
Material: 

• tubo hemolisis
• centrífuga baño agua 
  
  
•  pipeta Pasteur
•  gradilla 
•  reloj.

Reactivo: 

• solución salina 
• albúmina bovina
• suero anticoagulante de coombs. 

Muestra 

suero de receptor fresco hematíes del donante lavados tres veces.
Técnica
1. en un tubo vertemos una gota hematíes con donante y dos gotas de suero al receptor.
2 .mezclamos suavemente y dejar reposar tiempo ambiente de 2 a 3 minutos.
3. centrífuga  1700 revoluciones por minuto durante un minuto.
4 .añadimos al tubo albúmina 3 gotas.
5. metemos en q vamos a 37 grados centígrados durante 30 minutos centrífuga vamos a 1700 revoluciones  un minuto.
6. Observamos el resultado si no sale botón o no aglutinacion  son compatibles y si aparece botón o aglutina no son compatibles con lo cual seguiremos el procedimiento.
volveremos a lavar hematíes para eliminar anticuerpos y añadimos a él tubo una gota de suero humana de cooms y centrífugamos 1000 revoluciones por minuto durante 2 minutos y volvemos a leer resultados.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

La lectura se realiza resuspendiendo el botón hemático con suavidad después de cada centrifugación se mira en el microscopio a 40 x si se observa reacciones débiles (yo lo he mirado con el visualizador y no ha aglutinado en ninguna de las fases ).

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS 

Si no aglutina en ninguno de los pasos indica que son compatibles y por lo tanto puede hacerse la transfusión de sangre.

La aglutinación en cualquiera de las fases indica incompatibilidad.

Si se observa hemolisis en cualquiera de los pasos es incompatible también.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor ? suero del receptor y hematíes del donante.
2. Cuando se debe realizar la prueba cruzada menor ?cuando se enfrenta el suero del donante con  los hematíes del recetor.
3. ¿por  qué  debemos realizar la prueba en medio salino y albumininoideo ? para detectar todos los antígenos presentes
4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs ? Para detectar los anticuerpos que hayan quedados fijados a la membrana eritrocitaria.

RESULTADOS

Determinación de fenotipo y genotipo RH

Material:
tubo centrífuga centrífuga rotulador pipeta Pasteur gradilla
Reactivos:
suero anti D
suero anti C
suero anti e
suero anti E
suero anti c
solución salina fisiológica
Muestra:
suspensión de hematies lavados 5 %en solución salina fisiológica
Técnica:
1 lavamos los hematíes como la práctica anterior rótulamos 5 tubos D,C,E,e,c.
2 en cada tubo añadimos una gota antisuero correspondiente y una gota de suspensión de hematies homogeneizamos.
3. Centrifugamos todos los tubos duranre 1 minuto a 1000rpm.
Resultado:
Golpeamos el fondo de los tubos (+) preaencia de aglutinacion y se observa con la presencia de grumos rojos sobre un contenido claro.
(-)Ausencia de aglutinacion y se obseva suspension homogenea de hematies en un liquido rojizo.
Interpretacion clinica:
D(-): no aglutina
E,e,C,c : aglutina(+) ... dCe/dcE-dCE/dce.
Resultado wiener Fy.

Determinación grupo RH en tubo

Fundamentó: poner de manifiesto la presencia del antígeno de la superficie de los hematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti D.
Material tubo centrífuga rotulador gradilla pipeta Pasteur y centrífuga reactivos suero anti D albúmina bovina 30 % solución salina fisiológica.
Técnica:
1 rótula tubo de Ia vete ya en el tubo de añadimos una gota de suero anti D y en el tubo a añadimos una gota de albúmina
2 a los tubos añadimos una gota de suspensión hematíes agitamos
3 centrífugo minuto ni revoluciones por minuto o 30 segundos 3500 revoluciones.
Resultado golpeamos el tubo para despegar el tapón hemático que aparece si aparece  positiva aglutinacion se forman grumos de color rojo en líquido claro
si hay aglutinacion negativa se resuspende homogéneamente hematíes.
En tubo albúmina es control negativo y siempre da ausencia de aglutinacion. si no es así repetimos la prueba.
Interpretación clínica en el tubo de aglutinacion tubo a no r.h positivo en ningún tubo hay aglutinación incubamos  30 minutos después centrífugo mi revoluciones por minuto un minuto y observamos si persiste la negatividad el paciente no posee DO si después de todo esto no hay aglutinacion el paciente es Rh negativo