Electroforesis de la hemoglobina

MATERIAL : 

• TIRAS DE CELLOGEL
• RODILLO
• CUBETAS 
• FUENTE DE ALIMENTACIÓN
• PLACA DE VIDRIO
• TUBO DE ENSAYO 
• APLICADOR ELECTROFORESIS

REACTIVO:

• SUERO FISIOLÓGICO
• AGUA DESTILADA
• SOLUCIÓN DECOLORANTE (acido acetico) 
• SOLUCIÓN TRANSPARENTADORA 
• CLOROFORMO
• METANOL
• TAMPON 
• COLORANTE : NEGRO AMIDO O ROJO PUNZÓN .

MUESTRA :

Sangre venosa o capilar 

TECNICA: 

1. Vertemos 3ml de sangre y centrifugamos 10 minutos ,quitamos el sobrenadante y vertemos 4 ml de suero salino y centrifugamos 10 minutos y retiramos el sobrenadante .hemolizamos.
2. Repetimos el proceso 2 veces mas con 4 ml de suero salino y hemolizar. 
3. En el ultimo centrifugado quitamos el sobrenadante y vertemos 1.5ml suero salino, 0.5 cloroformo y con pipeta pasteur hemolizamos y meter en cetrifuga 3000 rpm durante 20 minutos. 
4. Llenamos la cubeta de electroforesis con tampon y meter tiras de cellogel durante 10 minutos 
5. Ponemos las tiras en los puentes de electroforesis el pico mirando hacia nosotros y a la derecha del cable negro .
6. La muestra ira del catado hacia el ánodo .
7. Vertemos la tira en solución colorante realizado con rojo punzón 
8. Vertemos las tiras en solución decolorante 3 lavados durante 10 minutos cada uno y después lo agitamos durante 5 minutos cada decoloración  sumergimos las tiras en metanol durante 1 minuto 
9. Vertemos la tira en solución tansparentadora durante 2-3 minutos , sacamos las tiras y las colocamos en placa de vidrio colocamos la cara absorbente boca abajo y aplastamos con rodillo .
10. Metemos en la estufa la placa de vidrio con las tiras durante 5-6 minutos a temperatura 60º hasta que la tira quede transparente.

RESULTADOS: 

LA TIRA PUEDE APARECER DE VARIAS MANERAS 

• B-TALASEMIA: ausencia de hemoglobinaB , HBA(3.5%) HBA2 (10%)ESTA ALTERADA.
• ANEMIA FALCIFORME HOMOCIGOTICA : las dos copias del gen están alteradas HBA - HBS (80-100%)
• ANEMIA FALCIFORME HETEROCIGOTICA : 1 copia esta bien y otra mal ,están casi igual  HBA(25-60%) HBS (25-60%)