Determinación del grupo RH en Porta

Fundamento:
se basa en la detención de antígeno de sobre superficies de los hematíes problema, empleando como reactivo suero monoclonal humano contiene anticuerposD. En el caso que los hematíes contenga el antígenoD se producirá una aglutinación.

Material

•  porta
•  pipetaPasteur
•  rotulador
•  visualizador luminoso
•  palillos agitadores

Reactivo

 suero anti d y albúmina bovina

Muestra

 sangre total anticoagulada

Técnica:
1.dividir puerta y marcamos S-A depositamos dos gotas de suero anti D seccion S y seccion A poner 2 gotas albúmina 
2. depositamos una gota de sangre en cada sección y mezclamos con los palillos agitadores 
3. poner portada en mis realizador calentado y balancear para facilitar la mezcla.

Resultado:
tras esperar dos minutos aparecerá aglutinacion positiva aparecen grumos rojos aglutinación negativa la mezcla da lugar a suspensión homogénea de hematíes.
la mezcla sangre más albúmina debe dar siempre negativo

HOJA DETRABAJO :

1. ¿Qué tipo de muestraEMPLEAMOS en esta técnica ? sangre total anticoagulada.
2. ¿Para qué se utiliza el visualizador ? para favorecer la mezcla de sangre y reactivos.
3. ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones ?  pequeños coagulos de fibrinaCONTENIDOS en la muestra .
4. ¿Qué ocurre si aglutina la sección A ? que no se puede informar los resultados,esta sección debe ser  siempre negativa.

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :
La sangre analizada es Rh positivo

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA:

FUNDAMENTO:
Consiste en observar la aglutinacion de los hematies enfretados a una serie de antisueros coincidiendo y de reconocida eficacia , para determinar el grupo ABO del individuo.

MATERIAL:

• Portaobjetos
• Pipeta pasteur
• Palillos mezcladores
• Reloj.

REACTIVOS:

• Suero anti-B.
• Suero anti-A.

MUESTRA:

• Sangre capilar o Venosa. 

TÉCNICA:

1. Dividimos el porta en dos secciones A/B .
   
2. Depositamos una gota de suero de anti-A y anti -B. y ponemos la misma cantidad de sangre que de suero.
   
3. Mezclamos las gotas con un palillo ,diferente para cada seccion y mover el porta de arriba y abajo ,durante 2 minutos y observamos la aglutinación.

LECTURA RESULTADOS:

• Si es positivo sale aglutinación y negativo ausencia de aglutinación , aparece en unos segundos.
• Si sale A hay que hacer la misma técnica para ver que tipo de A es ..en mi caso aparece A1.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

Hematíes y suero anti-A                Hematíes y suero anti-B            Grupo eritrocitario. 

                     +                                     -                                            A                    

                    -                                       +                                           B                      

                  +                                         +                                          AB                      

                   -                                         -                                           0                        

HOJA DE

 TRABAJO

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ? La aglutinación.
2. ¿Qué muestra utilizamos ? Sangre capilar como  se ve la aglutinación positiva ?Grumos rojos que flotan sobre el líquido antisuero.
3. ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A? Reexaminar la reacción del anti -A1 al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil.

Resultados obtenidos

• Lorena, es del grupo A ,le hemos repetido la muestra con anti -A 1 y sigue aglutinando.
• Ainoha,es del grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.
• IGNACIA  grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.

DETERMINACION CELULAR EN TUBO :

FUNDAMENTO: 

Consiste en buscar presencia o no de aglutinaciones en los hematíes reaccionados. 

MATERIAL:

• 4Tubo centrifuga.
  
• Rotulador .
• Pipeta Pasteur.
• Centrifuga. 
• Gradilla.

REACTIVOS:

• Suero anti- A
• Suero anti- B
• Suero anti - AB
• Solución salina fisiológica.

MUESTRA: Sangre anticoagulada bolsa.

TÉCNICA: 

1. Cojo 2 tubos cónicos y añado 1 ml de sangre y 2 ml suero fisiológico ,centrifugo 2000 rpm - 4 minutos.
2. Retiro sobrenadante y cojo 2 gotas de el poso  y lo echo a un tubo de centrifuga y añado 5ml suero salino y homogeneizar .
3. Añado a cada tubo A,B,C una gota de suspensión ,después cojemos el reactivo y pongo 2 Gotas de antisuero A al tubo A ,el antisuero B al tubo B Y antisuero AB  al tubo AB .
4. Centrifugo todos los tubos a 1000 rpm por 1 minuto.

LECTURA RESULTADOS:

Después de centrifugar ,golpeamos el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y observamos la presencia o no de aglutinación .

Reacción positiva : Los hematíes se suspende homogéneamente.

Reacción negativa: se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que tipo de tecnica inmonologica se emplea en este analisis?La aglutinación.

2.¿A que concentracion se prepara la suspension de hematies problema? 2% O 4%

3.¿Como se ve una aglutinacion positiva? Se observa un botón de hematíes 

4.¿A que se debe el fenomeno roleaux?al fibrinógeno, las gammaglobulinas ,el dextrano y la polivinilpirrolidona.

5.¿Como se pueden evitar los falsos positivos?Con el lavado previo de los hematíes problema .

determinación sérica del grupo AB0

Fundamentó
el suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente antígenos que no están presentes en sus propios hematies,por eso, al hacer reaccionar este  suero con hematíes conocidas del grupoA y grupoB  se producirán aglutinacion al ser enfrentado con antígenos diferentes de los propios hematies.

Material:
Tubo centrifuga
Pipeta pasteur
Bago agua
Centrifuga
Gradilla
Rotulador

Reactivos:
Hematies grupoA1
Hematies grupoA2
Hematies grupo B
Hematies grupo0
Hematies sangre problema

Muestra: 

suero

Tecnica:

1.  Para evitar falsos negativos presencia de complemento activo realizamos un baño de agua a 56 grados durante diez minutos así evitamos los fenómenos de hemolisis.
2.  Lavamos tres  los hematíes con solución salina y cogemos en hematies del 5 %.
3. Rotulamos los tubos con A1,A2,B,O y C.
4.  Añadimos dos gotas de suero inactivado y echamos una gota de hematies correspondiente a su letra y la letra C vertemos una gota de henaties qué sirve como control negativo 
5.  Agitamos y centrífugamos 1000rpm durante  un minuto.

Resultados:
Golpeamos el fondo del tubo y observamos si hay grumos rojos ,hay aglutinacion y si se aprecia homogeneizado no hay agulinacion.

HOJA DE trabajo

1. ¿Que son los hematíes tipados ?son los que sabemos de que grupo son.
2. ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente?al 5%
3. ¿Qué clase de muestra se enplea en esta técnica ? suero del paciente inactivado o plasma.
4. ¿Qué ocurre cuando el tubo C presente aglutinación ? Que hemos cometido algún error.

RESULTADOS OBTENIDOS

NO ME HA SALIDO BIEN LA PRACTICA AGLUTINABAN TODOS LOS TUBOS.

El resultado no se puede interpretar.

Deteminacion Du

Fundamento: 

observar si hay Du en superficie de membranas de eritrocitos, se produce la union de anticuerposD y dara lugar a aglutinacion en presencia suero humano .se realiza cob prieba de coombs indirecta.
Material:

• Tubo hemolisis
• Centrifuga
• Pipeta pasteur
• Gradilla
• Baño agua

Reactivo:

• Suero antiD
• Suero coomb
• Solucion salina fisiologica.

Muestra:

 hematies 5%

Tecnica:
1.en n tubo vertemos una gota suero antiD y una gota hematies al 5%.
2.Mezclamis e incubamos 37° durante 30-45 minutos
3. Despues de incubar lavamos hematies solucion salina 3 veces .
4. Añadimos sobre sedimento hematico 1 gota suero coombs
5. Centrifugamis 1000rpm durante 1 minuto.
Resultados:

Observamos aglutinacion o o no caso de duda observamos al micro con ayuda de un porta y cubre el tapon hematico a 40x.
Interpretacion clinica:
Si hay aglutinacion es positivo y se indica Rh Du.
No aglutinacion se clasifica como Rh negativo.
Para evitar falsoa positivos se realiza una prueba de coombs directa.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué contiene el suero de Coombs ?suero antiglobulina humana de conejo.
2. ¿Qué se detecta con  la prueba directa ?un falso positivo.
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?un Rh + Du (débil).
4. ¿Qué buscamos en la sangre del paciente ?antígeno Du.
5. ¿Qué ocurre si el control es positivo ? que la membrana de los hematíes del paciente hay antígeno Du.

Determinación rápida de la hemoglobina

Fundamentó 

se basa en la concentración de hemoglobina sea superior a la permitida esto se ve con una solución de sulfato de cobre si se queda arriba tiene anemia y no puede donar y si se continúa abajo es que la concentración de hemoglobina baja y no tiene anemia
Material

• capilar 
• lanceta
• vaso de precipitados 50 mililitros 

Reactivo:

• Disolver 17g sulfuro de cobre en 100 ml agua destilada.
• Mezclar 51ml solucion madre con 49ml agua destilada.

Muestra:
Sangre capilar
Tecnica:
1.Disponer la solucion de sulfato de cobre en un vaso precipitado 50ml.
2.recoger 1 gota sangre problema.
3. Dejamos caer 1 gota sangre sobre soluccion sulfato de cobre.

Lectura resultados:
Si la gota sangre ea mas densa cae al fondo del vaso. Si la gota es menos densa se queda en la superficie del vaso precipitado.
Interpretacion clinica:
  Si la concentración de Hb es superior a 12 g/dl,la persona puede donar sangre,en casa contrario,la donación no puede ser realizada.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener  una mujer antes de la donación ? 12,5g/dl
2. con  qué otra solución comparamos la densidad de la sangre ?con solución de sulfato de cobre a una densidad de 1,052g/dl

Prueba cruzada mayor

Fundamento :

para antes de Transfusiones .consiste en enfrentar al suero del receptor con hematies del donante
1 en medio salino
2 en medio aluminoso
3 frente al suero antiglobulina the Combs (detectan los anticuerpos que se hayan quedado fijados en la membrana eritrocitaria).
Material: 

• tubo hemolisis
• centrífuga baño agua 
  
  
•  pipeta Pasteur
•  gradilla 
•  reloj.

Reactivo: 

• solución salina 
• albúmina bovina
• suero anticoagulante de coombs. 

Muestra 

suero de receptor fresco hematíes del donante lavados tres veces.
Técnica
1. en un tubo vertemos una gota hematíes con donante y dos gotas de suero al receptor.
2 .mezclamos suavemente y dejar reposar tiempo ambiente de 2 a 3 minutos.
3. centrífuga  1700 revoluciones por minuto durante un minuto.
4 .añadimos al tubo albúmina 3 gotas.
5. metemos en q vamos a 37 grados centígrados durante 30 minutos centrífuga vamos a 1700 revoluciones  un minuto.
6. Observamos el resultado si no sale botón o no aglutinacion  son compatibles y si aparece botón o aglutina no son compatibles con lo cual seguiremos el procedimiento.
volveremos a lavar hematíes para eliminar anticuerpos y añadimos a él tubo una gota de suero humana de cooms y centrífugamos 1000 revoluciones por minuto durante 2 minutos y volvemos a leer resultados.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

La lectura se realiza resuspendiendo el botón hemático con suavidad después de cada centrifugación se mira en el microscopio a 40 x si se observa reacciones débiles (yo lo he mirado con el visualizador y no ha aglutinado en ninguna de las fases ).

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS 

Si no aglutina en ninguno de los pasos indica que son compatibles y por lo tanto puede hacerse la transfusión de sangre.

La aglutinación en cualquiera de las fases indica incompatibilidad.

Si se observa hemolisis en cualquiera de los pasos es incompatible también.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor ? suero del receptor y hematíes del donante.
2. Cuando se debe realizar la prueba cruzada menor ?cuando se enfrenta el suero del donante con  los hematíes del recetor.
3. ¿por  qué  debemos realizar la prueba en medio salino y albumininoideo ? para detectar todos los antígenos presentes
4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs ? Para detectar los anticuerpos que hayan quedados fijados a la membrana eritrocitaria.

RESULTADOS

Determinación de fenotipo y genotipo RH

Material:
tubo centrífuga centrífuga rotulador pipeta Pasteur gradilla
Reactivos:
suero anti D
suero anti C
suero anti e
suero anti E
suero anti c
solución salina fisiológica
Muestra:
suspensión de hematies lavados 5 %en solución salina fisiológica
Técnica:
1 lavamos los hematíes como la práctica anterior rótulamos 5 tubos D,C,E,e,c.
2 en cada tubo añadimos una gota antisuero correspondiente y una gota de suspensión de hematies homogeneizamos.
3. Centrifugamos todos los tubos duranre 1 minuto a 1000rpm.
Resultado:
Golpeamos el fondo de los tubos (+) preaencia de aglutinacion y se observa con la presencia de grumos rojos sobre un contenido claro.
(-)Ausencia de aglutinacion y se obseva suspension homogenea de hematies en un liquido rojizo.
Interpretacion clinica:
D(-): no aglutina
E,e,C,c : aglutina(+) ... dCe/dcE-dCE/dce.
Resultado wiener Fy.

Determinación grupo RH en tubo

Fundamentó: poner de manifiesto la presencia del antígeno de la superficie de los hematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti D.
Material tubo centrífuga rotulador gradilla pipeta Pasteur y centrífuga reactivos suero anti D albúmina bovina 30 % solución salina fisiológica.
Técnica:
1 rótula tubo de Ia vete ya en el tubo de añadimos una gota de suero anti D y en el tubo a añadimos una gota de albúmina
2 a los tubos añadimos una gota de suspensión hematíes agitamos
3 centrífugo minuto ni revoluciones por minuto o 30 segundos 3500 revoluciones.
Resultado golpeamos el tubo para despegar el tapón hemático que aparece si aparece  positiva aglutinacion se forman grumos de color rojo en líquido claro
si hay aglutinacion negativa se resuspende homogéneamente hematíes.
En tubo albúmina es control negativo y siempre da ausencia de aglutinacion. si no es así repetimos la prueba.
Interpretación clínica en el tubo de aglutinacion tubo a no r.h positivo en ningún tubo hay aglutinación incubamos  30 minutos después centrífugo mi revoluciones por minuto un minuto y observamos si persiste la negatividad el paciente no posee DO si después de todo esto no hay aglutinacion el paciente es Rh negativo

Electroforesis de la hemoglobina

MATERIAL : 

• TIRAS DE CELLOGEL
• RODILLO
• CUBETAS 
• FUENTE DE ALIMENTACIÓN
• PLACA DE VIDRIO
• TUBO DE ENSAYO 
• APLICADOR ELECTROFORESIS

REACTIVO:

• SUERO FISIOLÓGICO
• AGUA DESTILADA
• SOLUCIÓN DECOLORANTE (acido acetico) 
• SOLUCIÓN TRANSPARENTADORA 
• CLOROFORMO
• METANOL
• TAMPON 
• COLORANTE : NEGRO AMIDO O ROJO PUNZÓN .

MUESTRA :

Sangre venosa o capilar 

TECNICA: 

1. Vertemos 3ml de sangre y centrifugamos 10 minutos ,quitamos el sobrenadante y vertemos 4 ml de suero salino y centrifugamos 10 minutos y retiramos el sobrenadante .hemolizamos.
2. Repetimos el proceso 2 veces mas con 4 ml de suero salino y hemolizar. 
3. En el ultimo centrifugado quitamos el sobrenadante y vertemos 1.5ml suero salino, 0.5 cloroformo y con pipeta pasteur hemolizamos y meter en cetrifuga 3000 rpm durante 20 minutos. 
4. Llenamos la cubeta de electroforesis con tampon y meter tiras de cellogel durante 10 minutos 
5. Ponemos las tiras en los puentes de electroforesis el pico mirando hacia nosotros y a la derecha del cable negro .
6. La muestra ira del catado hacia el ánodo .
7. Vertemos la tira en solución colorante realizado con rojo punzón 
8. Vertemos las tiras en solución decolorante 3 lavados durante 10 minutos cada uno y después lo agitamos durante 5 minutos cada decoloración  sumergimos las tiras en metanol durante 1 minuto 
9. Vertemos la tira en solución tansparentadora durante 2-3 minutos , sacamos las tiras y las colocamos en placa de vidrio colocamos la cara absorbente boca abajo y aplastamos con rodillo .
10. Metemos en la estufa la placa de vidrio con las tiras durante 5-6 minutos a temperatura 60º hasta que la tira quede transparente.

RESULTADOS: 

LA TIRA PUEDE APARECER DE VARIAS MANERAS 

• B-TALASEMIA: ausencia de hemoglobinaB , HBA(3.5%) HBA2 (10%)ESTA ALTERADA.
• ANEMIA FALCIFORME HOMOCIGOTICA : las dos copias del gen están alteradas HBA - HBS (80-100%)
• ANEMIA FALCIFORME HETEROCIGOTICA : 1 copia esta bien y otra mal ,están casi igual  HBA(25-60%) HBS (25-60%)

CONCENTRACIÓN HEMOGLOBINA:

MATERIAL :

• 3Tubos
• Pipeta 5ml
• Micropipeta

MUESTRA: 

Sangre capilar o venosa anticoagulada. 

REACTIVO :

RT : DRAKIN

CALIBRADOR: HEMOGLOBIN CAL .

TÉCNICA: 

Preparamos los tubos y rotulamos.

1. BLANCO : 2.5 ml drakin
2. PATRÓN : 2.5 ml drakin + 10 microlitros calibrador
3. MUESTRA : 2.5 ml drakin + 10 microlitros sangre. 

Homogeneizamos con agitador durante o esperar en temperatura ambiente durante 5 minutos 

Metemos en espectofotometro a 540 nm y sacamos la concentración de la muestra . 

calculamos : (A) MUESTRA  / (A) PATRÓN X 15 g/dl.

FUNDAMENTO:

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en ciametahemoglobina. 

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada .

RESULTADO :

Hombre: 14-18g/dl

mujer: 12-16 g/dl

SIGNIFICADO CLÍNICO:

Cuando los niveles HB aparece bajo indica anemias primarias , cáncer, embarazo , enfermedad renal o hemorragias. 

ascenso de HB se debe a cardiopatias , desidratacion o estancia en lugares de gran altitud .

HIERRO

MATERIAL:

• Pipeta 
• 4 Tubos de ensayo 
• Micropipeta 
• Vaso precipitado
• Espectofotometro

REACTIVO:

RT: COMPUESTO POR R1-R2

R3: COLOR 

PATRÓN :ION CAL 

MUESTRA:

Suero sacado de sangre fresca.

TÉCNICA:

• En cada tubo de ensayo vertemos las cantidades indicadas , no olvidar rotular los tubos.

1. TUBO1 (BLANCO RT): 1ML RT , 1 GOTA R3, AGUA DESTILADA 200MICROLITROS.
2. TUBO2  (PATRÓN):1MLRT, 1 GOTA R3,200MICROLOTROS ION CAL.
3. TUBO3 (BLANCO MUESTRA) : 1ML RT , 200MICROLITROS SUERO
4. TUBO 4 (MUESTRA) : 1ML RT , 1 GOTA R3 , 200MICROLITROS SUERO 

• Dejamos reposar 10 minutos a temperatura ambiente o baño maría a 37º durante 5 minutos.
• Leemos las absorbancias (A)del patrón y la muestra frente al blanco de reactivo:

MUESTRA - BLANCO MUESTRA / PATRÓN X 100 

FUNDAMENTO :

Determinar la concentración de hierro en sangre . El hierro se disocia del complejo serico hierro-tranferrina en un medio ácido débil . El hierro es libre se reduce a ion ferroso mediante el ácido ascorbico .

LECTURA RESULTADOS : 

El hierro es necesario para la producción de hemoglobina su descenso produce anemia ferropenica . se encuentra niveles elevados de cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones elevadas de tranferrina. el diagnostico clínico debe realizarse según todos los datos clínicos y del laboratorio.

VALORES DE REFERENCIA: 

HOMBRES: 65-175 microlitro/dl

MUJERES: 40-150 microlitro /dl 

cada laboratorio ejerce sus propios valores de referencia.

DETECCIÓN DE CRIOGLOBULINAS.

FUNDAMENTO:
Se basa en la exposion del suero problema a la accion de una temperatura baja. si el suero problema contiene crioglobulinas ,estas precipitan con el frio y el precipitado formado adopta el aspecto de particulas blanquecinas.

MATERIAL:

• Pipeta pasteur 
• Tubo de ensayo.
• Gradilla.
• Nevera.
• Baño agua
• Capilar hematorito 
• Plastilina
• Centrifuga microhematocrito
• Regla o Microhematocrito.

MUESTRA:

Suero obtenido de la centrifugacion de sangre.

TÉCNICA:

1. Depositar el suero en un tubo de ensayo.
2. Colocamos el tubo que contiene el suero en una nevera a temperatura 4- 6ºC.
3. Examinamos el tubo a los 30  minutos después.

LECTURA RESULTADOS:

• Si aparecen partículas blanquecinas en el suero, este ha de ser incubado a 37 durante 5 minutos.Si no desaparece después consideramos que se deben a restos de fibrina,y si desaparece se estima que son crioglobulinas precipitadas.
• El grado de positividad se establece por el aspecto (casi turbio,turbio,lechoso) y el grado de positividad (+,++,+++)
• si la prueba da positivo ,realizaremos la determinacion de criocrito.

1. Llenamos el capilar con el suero las 3/4 partes.Sellamos el extremo con plastilina.
2. Enfriamos el tubo hasta que aparece precipitacion de las crioglobulinas.
3. Centrifugamos en microhematocrito a 12000 rpm a 5 minutos.
4. Calculamos el precipitado con regla o micrihetocrito.

La practica echa en clase no aparecían partículas blanquecinas.

El resultado lo calcularíamos :

HCT=E X 100 / T .

INTERPRETACIÓN  CLÍNICA: 

CRIOGLOBULIAS.

TIPOI: Trastornos proliferativos.

TIPOII: Idiopaticas o secundarios , diferentes enfermedades.

TIPOIII: Infecciones sistematicas y procesos autoinmunes.

MANIFESTACIONES CLÍNICAS:

• ELEVADA VISCOSIDAD: Conduce a una estasis sanguínea en algunos vasos corporales y aparece en trastornos isquemicos.
• PRECIPITACIÓN CRIOGLOBULINAS: Origina una obstrucción vascular que puede ocasionar una arocianosis.
• DEPOSITO DE INMONOCOMPLEJOS: Puede ser causa de la aparición de daños renales o articulares.

DETERMINACIÓN DEL VALOR HEMATOCRITO MEDIANTE EL MICRÓMETODO.

MATERIAL:

• Tubos capilares de vidrio 
• Plastilina
• Algodón  o gasas.
• Una centrifuga de microhematocrito.
  
• Una regla  milimetrada o un lector de microhematocrito.

REACTIVOS: EDTA.

MUESTRA:

sangre capilar o venosa . esta debe ser recogida en tubo con edta .

si se usa sangre capilar se ha desechar la 1º gota tras la punción. Si se emplea sangre venosa, se deberá homogeneizar antes de su uso .

FUNDAMENTO:

El hematocrito  puede determinarse por métodos manuales o por métodos automáticos.

Los métodos manuales consisten en la centrifugacion de la sangre ,aplicando una fuerza de 2000 a 5000 o 12000 a 15000.

los métodos automáticos pueden basarse en 2 principios:

• El calculo del hematocrito a partir de los valores de RBC y de volumen corpuscular medio , obtenidos electromecánicamente con anterioridad.
• El análisis de la sombra que produce la población eritrocitaria, al reflejarse en un campo oscuro .

TÉCNICA: 

1. La determinación ha de hacerse por duplicado
2. Llenar cada tubo capilar con la sangre ,hasta las 3/4 partes de su longitud . El llenado se efectúa por capilaridad y se realiza poniendo en contacto uno de los extremos del tubo capilar con la gota de sangre, o introducirlo en el tubo de sangre e inclinando este, para facilitar el proceso.
3. Limpiar el exterior de cada tubo con un trozo  de algodón o gasa. 
4. Sellar el extremo de cada tubo por donde a entrado la sangre con plastilina.
5. Colocar equilibrados los tubos en la centrifugadora . En ella los tubos se sitúan con su extremo tapado hacia afuera y colocandolo en sus surcos hasta que queden bien sujetos.
   
   0
6. Centrifugar los tubos a unas 1200 RPM durante 5 minutos.

LECTURA DE RESULTADOS:

Puede realizarse de 2 maneras:

• Midiendo las columnas formadas en el interior de cada tubo con una simple regla milimetrada y calculando el porcentaje que le corresponde a la columna de eritrocitos, mediante una sencilla regla de tres.
• Mediante un lector de microhematocrito.
  
  
  
  
  

Entre los valores obtenidos con los dos tubos no debe haber una diferencia superior al 2% del mayor de ellos.

Si esta diferencia es superior al 2% se repite la determinación y si es inferior se da como valor final la media de ambos tubos.

Si el valor final de hematocrito es superior a 50 se repite la determinación pero alargando el tiempo de la centrifugadora a 10 minutos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

El valor normal del hematocrito esta comprendido entre el 42% y el 47% en las mujeres y 
.entre el 45 %y 52% en los varones.

Un valor bajo de HCT suele ser signo del padecimiento de una anemia . Sin embargo hay falsos descensos del HCT ocasionando por hemodilucion .

El hematocrito suele ser normal en la fase mas temprana de las hemorragias agudas, pues en estas se pierden células y plasma en la misma proporción.

Un valor alto de HCT suele ser signo del padecimiento de una poliglobulina. Sin embargo también hay engañosos ascensos del HCT producidos por hemoconcentración.

RECUENTO DE HEMATÍES.

MATERIAL:

• Pipeta diluidora de Thoma ,para recuento de glóbulos rojos.
• Un tubo de goma con boquilla,adaptable a la pipeta diluidora.
• Una cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado.
• Un cubre.
• Microscopio.
  

REACTIVOS:

Liquido de dilucion . Este debe ser isotónico con el plasma, para evitar la alteración morfológica e incluso la lisis de los hematíes.

El mas utilizado es HAYEM.

Si contiene precipitados, antes de usarlo se debería de filtrar.

MUESTRA:

Sangre obtenida por punción del pulpejo de un dedo o sangre venosa procedente de una punción  venosa y anti coagulada con  EDTA.

FUNDAMENTO:

Para el recuento en cámara de glóbulos rojos, se diluye la sangre problema en un liquido apropiado y posterior se deposita en la cámara de recuento , donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los retículos. 

TÉCNICA:

1. Situar un cubre sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión a esta , se ejerce una ligera presión al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales ,Humedecemos con agua de su porción central.
2. Aspiramos la sangre hasta 0.5 si creemos que es policitemia. o 1ml si pensamos que sufre anemia.
3. Limpiar con cuidado el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre.
4. Aspirar liquido diluyente hasta la  señal 101.
5. Desechar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido del bulbo.Para ello se sujeta la pipeta del extremo, con los dedos pulgar e indice y se agita suavemente en sentido horizontal durante 2 o 3 minutos.
   
6. Desechamos las 3 primeras gotas, ya que contienen liquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta Thoma, que no esta mezclado con la sangre.
7. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre . Esto se realiza hubicandola en uno de los bordes adheridos del cubre y dejándola que entre por capilaridad en el espacio existente entre ambas estructuras,hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la sangre por fuera de los bordes del cubre.
   
8. Dejar reposar la sangre diluidora contenida en la cámara durante unos minutos para que las células presentes sedimenten.
9. Enfocar el retículo con el objetivo de 40 x y con el condensador a baja altura , verificar que la distribución de los hematíes es homogénea.
10. Contar los hematíes presentes en 80 cuadrados pequeños del cuadrado grande central.

LECTURAS DE RESULTADOS:

Como se cuentan los hematies presentes en 5 cuadrados medianos del cuadrado grande central , y este tiene 25 cuadrados medianos, multiplicamos x5 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el numero de hematies qur hay en un cuadrado grande.

Como la longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central es 1mm y de longitud entre el cubre y este es de 0.1 mm , multiplicaremos x 10.

Como la sangre,se diluye hay que multiplicar el resultado anterior por 100, solo cuando la sangre sea 1mm.

RBC= H x 5 x 10 x D   

RBC... recuento de hematíes.

H ... hematíes contados en 5 cuadrados medianos.

D.... factor de dilucion..

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS:

La disminución del RBC se produce en las ANEMIAS y su aumento se da en las POLICITEMIAS.

Se considera normal un RBC comprendido entre los 4 y  los 5.5 millones / mm cúbicos en las mujeres y entre los 4.5 y los 6 millones /mm cúbicos en varones.

RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITROMETRO

MATERIAL.

• Tubo de ensayo 
• Pipeta de thoma gliobulos rojos
• tubo de goma boquilla roja 
• gasas
• camara recuento 
• cubre,microscopio,placa pletri, papel de filtro

REACTIVO:

1. Agua destilada
2. Sprinreact

MUESTRA:

Sangre venosa 

TECNICA:

1. Verter en el tubo 1 ml de l reactivo 
2. Con la pipeta thoma cogemos hasta la señal 1 
3. Limpiamos co las gasas ,Aspiramos el reactivo hasta la señal 101
4. Agitar la pipeta durante 5 minutos ,Desechamos las 5 primeras gotas
5. Poner la muestra en la camara neubauer
6. Recortar un circulo de papel de filtro y humedecemos con agua el papel y poner dentro de la de petri ,metemos la camara durante 15 minutos
7. Colocamos la camara en el microscopio y enfocamos 10x
8. Enfocamos uno de los cuadros granes con 40x y contamos las plaquetas de ese cuadro.

LECTURA DE RESULTADOS:

• Se efectua dilucion menor de la muestra y contar los trombocitos de varios cuadros
• Se efectua dilucion mayor de la muestra 

PLT/MM CUBICOS = P X V X D .

RECUENTO DE LEUCOCITOS

MATERIAL:

• Pipeta thoma o micropipeta
• tubo con boquilla roja
• cámara de recuento de neubauer
• cubre
• microscopio.

REACTIVO:

Turck - 475microlitros.

MUESTRA:

Sangre venosa -25 microlitros

TÉCNICA:

1. Seguimos el mismo proceso de recuento de hematies .Aspiramos si utilizamos pipeta thoma 1 de sangre y 101 de turck 
2. Si lo realizamos con micropipeta tomaremos 475 mirolitro de turck y 25 microlitros de sangre.
3.  Homolizamos la sangre 2-3 minutos.
4. Desechamos las tres primeras gotas y vertemos la sangre en el porta y dejamos reposar 1 minuto.
5. Enfocamos con el microscopio 40X .

FUNDAMENTO:

Sirve para determinar la cantidad de leucocitos en una cantidad de sangre.

RESULTADO:

Contamos los 4 cuadros grandes para calcular los leucocitos.

        WBC=L/4 X 10 X D

INTERPRETACIÓN CLÍNICA:

• Si hay un DESCENSO se produce leucopenias, si hay un AUMENTO se produce leucocitosis.
• Se considera un nivel normal un WBC comprendido entre 5000-11000 leucocitos /mm cúbicos.

DETERMINACIÓN DE INDICE LOBULARIDAD:

MATERIAL: 

• Lapiz
• Papel
• Microscopio.

MUESTRA:

• Sanfre capilar o venosa

REACTIVO:

• Panóptico rápido 
• Aceite de inmersión

TÉCNICA:

1. Realizamos una extensión 
2. Sumergimos el frotis en el colorante, dejamos secar.
3. vertemos una gota de aceite en la parte de observación.
4. Enfocamos con el objetivo de inmersión 100x
5. Clasificamos los neutrofilos según ARNETH ,Contamos al menos 100 neutrofilos.

LECTURA DE RESULTADOS:

IL= NL/NN          

NL= Numero de lóbulos contados.

NN= Numero de neutrofilos.

RESULTADO CLÍNICO:

• VALORES NORMALES: 1,9-3 
• DESVIACIÓN IZQUIERDA: Puede producir neutrofilia típica en infecciones agudas y neutropenia típica en  otras infecciosas "fiebre"
• DESVIACIÓN DERECHA: produce varios procesos patológicos como las anemias megaloblasticas.

Recuento de plaquetas en frotis sanguineos.

MATERIAL:

• MICROSCOPIO
• PAPEL
• LÁPIZ

REACTIVO:

PANÓPTICO RÁPIDO.

ACEITE DE INMERSIÓN

MUESTRA:

SANGRE CAPILAR O VENOSA.

TÉCNICA:

1. Realizamos un frotis con la sangre
2. El frotis una vez seco lo sumergimos en el panóptico rápido y dejamos secar.
3. ponemos una gota de aceite de inmersión en la zona de observación .
4. contamos el numero de plaquetas presentes en 10 campos.
5. calculamos la cifra media de plaquetas en 10 campos.

LECTURA DE RESULTADOS:

PLT/mm3 = PLT/C (10 CAMPOS) X 20000.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA:

Cuando se observa una extensión sanguínea con el objetivo de inmersión , en condiciones normales debe de haber 1 plaqueta por cada 10-20 hematíes.

Cuando el numero de plaquetas por milímetro cubico de sangre es inferior a 130000 se dice que hay una trombopenia o trombocitopenia y superior a 400000 trombocitosis .